کیت Xpert® C. difficile کمپانی Cepheid، یک ابزار تشخیصی پیشرفته و سریع برای شناسایی توالی ژن سم B در نمونه‌های مدفوع مایع یا نیمه جامد از بیماران مشکوک به عفونت Clostridium difficile (CDI) می‌باشد. این تست، که بر روی سیستم Cepheid GeneXpert® Dx انجام می‌شود، از روش Real Time PCR تمام اتوماتیک برای شناسایی توالی‌های ژنی مرتبط با تولید سم C. difficile استفاده می‌کند و به عنوان یک کمک در تشخیص CDI به کار می‌رود. کشت همزمان فقط در صورت نیاز به تایپینگ بیشتر یا بازیابی ارگانیسم ضروری است.
Clostridium difficile (C. difficile) یک باسیل بی‌هوازی گرم مثبت و تولید کننده هاگ است که اولین بار در سال 1978 به بیماری مرتبط شد.
عفونت C. difficile (CDI) می‌تواند از اسهال تا کولیت پسودوممبران شدید و تهدیدکننده حیات متفاوت باشد. فلور باکتریایی کولون در بزرگسالان سالم به طور کلی در برابر کلونیزاسیون C. difficile مقاوم است، اما در صورت تغییر فلور طبیعی کولون، این مقاومت از دست می‌رود. شایع‌ترین عامل خطر، استفاده از آنتی‌بیوتیک‌ها است. عامل اصلی ویروسی C. difficile، سیتوتوکسین B است.
ژن‌های کدگذاری‌کننده سم A (tcdA؛ انتروتوکسین) و سم B (tcdB) بخشی از لوکوس پاتوژنیسیته (PaLoc) هستند. بیشتر سویه‌های پاتوژنیک، سویه‌های سم A مثبت، سم B مثبت (A+B+) هستند، اگرچه سویه‌های متغیر سم A منفی، سم B مثبت (A-B+) نیز به عنوان پاتوژنیک شناخته شده‌اند.
برخی از سویه‌های C. difficile همچنین یک ADP-ریبوزیل‌ترانسفراز خاص اکتین به نام CDT یا سم دوگانه تولید می‌کنند. لوکوس سم دوگانه حاوی دو ژن (cdtA و cdtB) است و خارج از PaLoc قرار دارد.
در چند سال اخیر، شیوع CDI به دلیل سویه‌های “فوق‌العاده آلوده کننده” و مقاوم به فلوروکینولون متعلق به ریبوتایپ PCR 027، نوع PFGE NAP1 و نوع REA BI افزایش یافته است. این سویه‌ها تولید سم بیشتری دارند که به حذف‌های ژن تنظیمی tcdC نسبت داده می‌شود و اعتقاد بر این است که هاگ‌های بیشتری تولید می‌کنند، که منجر به پایداری بیشتر در محیط می‌شود.
تشخیص C. difficile به طور سنتی بر اساس شناسایی سم A یا B بوده است. روش کشت پر زحمت، به دنبال آزمایش سیتوتوکسیکیتی سلولی بر روی ایزوله‌ها و آزمایش سیتوتوکسیکیتی سلولی بر روی نمونه‌های مدفوع هنوز به عنوان “استاندارد طلایی” به دلیل اختصاصیت بالا محسوب می‌شوند. چندین آزمون ایمونواسی سریع برای شناسایی سم A و B توسعه یافته‌اند، اما این آزمون‌ها حساسیت و اختصاصیت کمتری نسبت به آزمایش سیتوتوکسیکیتی سلولی دارند. روش‌های PCR برای شناسایی سم A و/یا سم B اخیراً با حساسیت و اختصاصیت بالا در مقایسه با آزمایش‌های سیتوتوکسیکیتی و ایمونواسی توسعه یافته‌اند.
اصول عملکرد تست تمام اتوماتیک Xpert® C. difficile کمپانی Cepheid
سیستم GeneXpert Dx فرایندهای استخراج اسید نوکلوئیک و تکثیر ژن هدف را را با استفاده ازروش Real Time PCR تمام اتوماتیک و یکپارچه انجام می دهد. سیستم شامل یک ابزار، یک کامپیوتر شخصی و نرم‌افزار از پیش بارگذاری شده برای اجرای آزمون‌ها و مشاهده نتایج است. سیستم نیاز به استفاده از کارتریج‌های یکبار مصرف دارد که مواد PCR را نگه می‌دارند و فرآیند PCR را میزبانی می‌کنند. از آنجایی که کارتریج‌ها یکبار مصرف هستند، آلودگی متقابل بین نمونه‌ها حذف می‌شود.
آزمون Xpert C. difficile شامل معرف‌های شناسایی C. difficile توکسینوژنیک و همچنین کنترل فرآوری نمونه (SPC) است. SPC برای کنترل فرآوری مناسب باکتری هدف و نظارت بر حضور مهارکننده‌ها در واکنش PCR است. کنترل بررسی پروب (PCC) تکثیر ژن هدف، پر شدن لوله PCR در کارتریج، یکپارچگی پروب و پایداری رنگ را تأیید می‌کند.
مزایای آزمون Xpert® C. difficile
- تشخیص سریع و خودکار:
- آزمون Xpert C. difficile یک تست تشخیصی سریع و خودکار برای شناسایی کیفی تولید کننده سم C. difficile به طور مستقیم از نمونه‌های مدفوع غیرنرمال(مایع یا نرم) از بیماران مشکوک به CDI است.
- این آزمون توالی ژن سم B (tcdB) را شناسایی می‌کند و بر روی سیستم Cepheid GeneXpert Dx انجام می‌شود.
- سادگی در استفاده:
- تنها کافی است نمونه مدفوع آماده شده را به کارتریج GeneXpert اضافه کنید؛ نیازی به استخراج جداگانه نیست.
- کنترل‌های داخلی صحت و دقت آزمون را تضمین می‌کنند و کل فرآیند از نمونه تا نتیجه کمتر از 47 دقیقه زمان می‌برد.
- حساسیت و اختصاصیت بالا:
Sensitivity* 93.4%
Specificity* 94.0% - استانداردسازی نتایج:
- کیت شامل کنترل فرآوری نمونه (SPC) و کنترل بررسی پروب (PCC) برای تضمین دقت و صحت نتایج است.
نتیجه‌گیری
کیت Xpert C. difficile کمپانی Cepheid با ارائه دقت بالا و کاربری آسان، ابزاری حیاتی برای پایش و تشخیص سریع عفونت Clostridium difficile است که نقش مهمی در بهبود مدیریت بیماران مشکوک به CDI ایفا می‌کند. این کیت به پزشکان و متخصصین آزمایشگاه کمک می‌کند تا با دقت بیشتری به ارزیابی و نظارت بر روند بیماری بپردازند و نتایج قابل اعتماد و استانداردی را در اختیار داشته باشند.