توسط : Qualitative در برابر Quantitative
در یک Assay کیفی سؤال اصلی این است که Target در محدوده تعریف‌شده تست Detected است یا Not Detected. در Assay کمی، هدف تعیین مقدار Target در واحد مشخص است؛ برای مثال Viral Load. Quantification نیازمند Calibration، Range معتبر و قواعد تحلیلی مشخص است. بنابراین هر Real-Time PCR الزاماً یک تست کمی نیست.
Multiplex Real-Time PCR
در Multiplex PCR چند Target در یک Reaction بررسی می‌شوند. در Probe-based Real-Time PCR، پروب‌های متفاوت می‌توانند Fluorophoreهای متمایز داشته باشند تا دستگاه سیگنال‌ها را در کانال‌های مختلف تشخیص دهد. تعداد Targets قابل اندازه‌گیری به طراحی Assay و Optical channels پلتفرم بستگی دارد.
کنترل‌های ضروری
| کنترل | هدف |
| Positive Control | نشان می‌دهد سیستم توان Detection Target را دارد |
| Negative Control / NTC | پایش آلودگی و سیگنال ناخواسته |
| Internal Process Control | کنترل بخشی از فرآیند؛ بسته به Assay می‌تواند استخراج و/یا Amplification را پایش کند |
| Sample Processing Control | بررسی مناسب بودن پردازش نمونه در برخی سیستم‌ها |
| Probe/Reagent Check | در برخی پلتفرم‌ها برای ارزیابی عملکرد معرف/پروب پیش از یا حین تست |
| نام و عملکرد دقیق Internal Control باید از IFU همان Assay استخراج شود. نباید یک نوع کنترل را به تمام تست‌های یک Platform تعمیم داد. |
Sensitivity، Specificity، LoD و LoQ
چهار اصطلاح کلیدی در ارزیابی عملکرد Assay
Clinical Sensitivity توانایی تست برای شناسایی افراد واقعاً مثبت و Clinical Specificity توانایی تشخیص افراد واقعاً منفی است. Limit of Detection (LoD) پایین‌ترین مقدار Target است که با احتمال تعریف‌شده می‌تواند شناسایی شود. Limit of Quantification (LoQ) پایین‌ترین مقدار است که می‌تواند با عملکرد کمی از پیش تعریف‌شده اندازه‌گیری شود. LoQ برای همه Assayهای کیفی کاربرد ندارد.
